Određivanje sadržaja antistreptolizina O (ASO) temelji se na interakciji ASO ispitivanog uzorka s molekulama ljudskog streptolizina O (CO) imobiliziranim na površini čestica lateksa. Pri miješanju CO lateksa s krvnim serumom koji sadrži ASO u koncentraciji većoj od 200 IU/ml, kao rezultat reakcije između CO i ASO, dolazi do vizualno zabilježene aglutinacije čestica lateksa, što ukazuje na pozitivnu reakciju uzorka.
Materijal koji se proučava:
Krvni serum. Korištenje hemoliziranih i lipemičnih uzoraka je neprihvatljivo. Uzorci koji sadrže fibrinske čestice moraju se centrifugirati prije analize. Rok trajanja ispitivanih uzoraka na temperaturi od 2-8°C nije duži od 2 dana.
Sastav kompleta i uvjeti skladištenja:
- CO lateks
- Pufer
- Pozitivan kalibrator - ASO koncentracija > 200 IU/ml
- Granični kalibrator - ASO koncentracija ~ 200 IU/ml
- Negativan kalibrator - ASO koncentracija< 200 МЕ/мл
- Probna ploča i lopatice.
Reagensi su stabilni na temperaturama skladištenja od 2-8°C tijekom 18 mjeseci. Datum proizvodnje, rok valjanosti, serija i kataloški broj navedeni su na pakiranju kompleta.
Priprema reagensa za postupak analize:
Optimalna temperatura reagensa i okoline tijekom analize je 22-25°C. Na temperaturama ispod 18°C mogu se dobiti lažni rezultati.
CO lateks treba promiješati laganim mućkanjem prije upotrebe.
Analiza:
I. Kvalitativna definicija:
Stavite kalibratore i uzorke ispitnog seruma u volumenu od 20 µl u pojedinačne jažice ispitnih ploča. Dodajte 20 µl CO lateksa u svaku jažicu. Brzo pomiješajte sadržaj kapi ispitnog uzorka i CO lateksa u svakoj jažici pojedinačnom lopaticom dok ne postane homogen.
Reakcijsku smjesu miješati kružnim pokretima ispitne ploče na mehaničkoj orbitalnoj miješalici ili ručno pri brzini od 80-100 okretaja u minuti tijekom 2 minute. Proces aglutinacije treba zabilježiti unutar 1 minute nakon završetka pomicanja ispitne ploče. Značajno povećanje vremenskog intervala između zaustavljanja ispitne ploče i snimanja rezultata može dovesti do registracije lažne aglutinacije koja se javlja tijekom sušenja reakcijske smjese.
Tumačenje rezultata:
- Jasno vidljivi agregati čestica lateksa - koncentracija ASO > 200 IU/ml.
- Mali agregati - koncentracija ASO ~ 200 IU/ml.
- Ujednačeno homogena mliječna suspenzija - koncentracija ASO< 200 МЕ/мл.
II. Polukvantitativno određivanje:
Pripremite razrjeđenja ispitnih uzoraka pomoću pufera u skladu s tablicom
Stol
Provedite analizu dobivenih razrjeđenja u skladu sa stavkom I.
Referentne granice:
- do 200 IU/ml.
Specifičnost:
Antigen CO koji se koristi u kompletu reagensa CO visoko je specifičan za ljudski ACO i ne pokazuje križne reakcije s drugim proteinima u serumu u uvjetima testiranja.
PAŽNJA!
Ne dopustite da se kit smrzne tijekom skladištenja, jer to dovodi do gubitka sposobnosti CO lateksa da prođe reakciju aglutinacije, a posljedično i do lažno negativnih rezultata.
Dijagnostičke informacije:
Visoki titri ASO ukazuju na akutnu streptokoknu infekciju, pa se u ovom slučaju test mora ponoviti nakon tjedan dana kako bi se utvrdila dinamika bolesti. Povišene razine ASO u krvnom serumu tipične su za bolesnike oboljele od šarlaha, akutnog reumatoidnog artritisa, tonzilitisa i drugih streptokoknih infekcija, kao i za klinički zdrave kliconoše.
Književnost:
- Plotz i Singer, Amer. J. Med., 1979, sv.22.
Pažnja!
Za dezinfekciju stakalca trebate koristiti dezinficijense na bazi slobodnog klora - kao što su Chloramix, DP-2T, Javel Solid, Chlorapin.
Neprihvatljivo je koristiti proizvode na bazi vodikovog peroksida i fluora, posebno "Absolucide oxy".
ASLO izravni lateks ekspresni test (ASO izravni lateks)
Brzi test za polukvantitativno određivanje antistreptolizina O u serumu i krvnoj plazmi. Osjetljivost >200 IU/ml. Pozitivne i negativne kontrole, supstrat, mješalice. Vrijeme analize ne više od 3 minute.
Protutijela protiv streptolizina "O" (ASLO) proizvodi tijelo tijekom infekcije beta-hemolitičkim streptokokom kao odgovor na streptolizin "O" koji oslobađaju bakterije. Detekcija i kvantifikacija ASLO u serumu omogućuje određivanje činjenice i stupnja infekcije.
Svrha i princip metode
ASLO lateks reagens je suspenzija čestica lateksa senzibiliziranih streptolizinom “O”. Kada se reagens pomiješa s uzorkom seruma koji sadrži ASLO antitijela, dolazi do reakcije aglutinacije, koja se lako otkriva vizualno.
Spoj
- Reagens lateks, 5 ml (čestice lateksa senzibilizirane streptolizinom O, reagens sadrži natrijev azid 0,095%)
- Pozitivna kontrola, 0,5 ml (ljudski serum pozitivan na ASLO antitijela (>200 IU/ml), reagens koji sadrži natrijev azid 0,095%)
- Negativna kontrola, 0,5 ml (ljudski serum negativan na ASLO antitijela (<200 МЕ/мл), реагент содержит азид натрия 0,095%)
- Staklena podloga
- Mješalice za jednokratnu upotrebu
- upute
Ispitni uzorci
ASO lateks test br. 1 250 definicija (11.02)
UPUTEo korištenju seta reagensa"ASO LATEX-TEST"
Set reagensa za određivanje
antistreptolizin-O u reakciji lateks aglutinacije
- SVRHA
Za kvalitativno i kvantitativno određivanje antistreptolizina-O (ASO) u ljudskom serumu. Može se koristiti u dijagnostici i praćenju terapije reumatske groznice, akutnog reumatoidnog artritisa, glomerulonefritisa i drugih bolesti uzrokovanih ß-hemolitičkim streptokokom skupine A, C i G.
- POSTAVLJENE KARAKTERISTIKE
2.1. Princip rada
Imunološka interakcija ASO sa streptolizinom-O koji se nalazi na površini čestica lateksa. Rezultat interakcije je aglutinacija lateksa uz stvaranje malih ili velikih zrnaca koja se vizualno razlikuju.
2.2. Sadržaj skupa
ASO lateks reagens– suspenzija čestica polistirenskog lateksa obloženih streptolizinom-O; bijela suspenzija, tijekom skladištenja se odvaja u bijeli talog, koji se lako razbija mućkanjem, i bezbojnu prozirnu ili blago opalescentnu supernatantnu tekućinu.
Osjetljivost ASO lateks reagensa kalibrirana je prema međunarodnom standardu (WHO).
Fiziološka otopina (PS)– 0,9% otopina natrijeva klorida; sadrži konzervans - natrijev azid u konačnoj koncentraciji 0,1%; bistra bezbojna tekućina
Serum pozitivne kontrole (K+)— tekući ljudski krvni serum, inaktiviran zagrijavanjem na 56°C tijekom 1 sata, koji sadrži ASO u koncentraciji većoj od 200 IU/ml, daje negativnu reakciju na HBsAg i ne sadrži protutijela na HIV-1, HIV-2 i HCV ; sadrži konzervans – natrijev azid u konačnoj koncentraciji 0,1%; bistra, bezbojna ili žućkasta do crveno-smeđa tekućina.
Serum negativne kontrole (K –)- tekući ljudski krvni serum, inaktiviran zagrijavanjem na 56°C tijekom 1 sata, koji sadrži ASO u koncentraciji manjoj od 150 IU/ml, daje negativnu reakciju na HBsAg i ne sadrži protutijela na HIV-1, HIV-2 i HCV , sadrži konzervans - natrijev azid u konačnoj koncentraciji 0,1%; prozirna bezbojna ili žućkasta tekućina.
- ANALITIČKE I DIJAGNOSTIČKE ZNAČAJKE
ZAPOŠLJAVANJE
Komplet je dizajniran za 250 određivanja, uključujući kontrolne uzorke.
- MJERE OPREZA
Mjere predostrožnosti - poštivanje „Pravila dizajna, sigurnosnih mjera opreza, industrijske sanitarne uvjete, protuepidemijskog režima i osobne higijene pri radu u laboratorijima (odjelima, odjelima) sanitarnih i epidemioloških ustanova sustava Ministarstva zdravstva SSSR-a” (Moskva, 1981. ).
- OPREMA I MATERIJALI
— Orbitalna mućkalica (bilo koje marke s amplitudom vibracija od 10-20 mm).
— Graduirane pipete klase 2 točnosti ili dozatori za pipete.
— Automatske mikropipete ili pipete za miješanje (20 µl).
— Staklene ili plastične šipke.
— Sat ili mjerač vremena.
- UZORCI ANALIZIRANI
Koristi se svježe dobiveni krvni serum. Korištenje krvne plazme kao uzorka nije dopušteno. Prikupljanje krvi treba obaviti prema standardnoj proceduri. Uzorci se mogu čuvati 7 dana na 2-8 ˚S ili 3 mjeseca na minus 20 ˚S. Ne izlažite uzorke ponovnom zamrzavanju i odmrzavanju.
Serum koji se testira mora biti proziran i bez suspendiranih čestica.
Nemojte koristiti hemolizirane ili kontaminirane uzorke.
- PROVOĐENJE ANALIZE
7.1. Priprema ispitnih uzoraka
Prije upotrebe ostavite sve komponente kompleta najmanje 15 minuta na sobnoj temperaturi.
7.2. Provođenje analize
Kvalitativna definicija
Na karticu za postavljanje reakcija (prva ćelija kartice), jednu do druge, s razmakom od 2-3 cm (na susjednu ćeliju), nanijeti 20 μl K + 20 μl K – . Nanesite 20 µl ispitnih uzoraka na preostale stanice.
Lagano protresite bočicu kako biste pomiješali ASO-latex reagens i dodajte ga 20 µl u svaku ćeliju s uzorkom. Koristeći plosnati kraj pipete za miješanje (stakleni štapić), dobro promiješajte svaku kap (rasporedite reakcijsku smjesu po cijelom području ćelije). Za svaku kap upotrijebite novu pipetu za miješanje (stakleni štapić).
Njihajte karticu 2 minute, a zatim odmah zabilježite rezultate reakcije.
Određivanje titra
U epruvete ili jažice pločice razrijediti testni serum fiziološkom otopinom 9 g/l u omjerima (1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1: 7 i 1:8), zašto dodati 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 odnosno 80 μl fiziološke otopine na 10 μl seruma. Ako je potrebno, broj razrjeđivanja se može povećati.
Nanesite 20 µl svakog razrjeđenja u odgovarajuće jažice na kartici.
Lagano protresite bočicu kako biste pomiješali ASO-lateks reagens i dodajte 20 µl u svaku jažicu za razrjeđivanje, zatim promiješajte svaku kap kako je gore navedeno za kvalitativno određivanje.
Protresite karticu 2 minute, zatim zabilježite rezultate reakcije.
S kasnijim brojanjem mogu se dobiti iskrivljeni rezultati zbog nespecifične aglutinacije čestica.
- UPIS I OBRAČUN REZULTATA
Zabilježite rezultate vizualno.
Pozitivnim RAL-om smatra se svaka manifestacija lateks aglutinacije (bilo koji stupanj zrnatosti ili prepoznatljive čestice u bistroj ili zamućenoj tekućini u ćeliji).
Negativnim RAL-om smatra se odsutnost znakova lateks aglutinacije (tekućina u ćeliji ostaje mutna i homogena). Rezultate RAL-a s ispitivanim serumima treba uzeti u obzir samo ako postoji pozitivna reakcija s K + i negativna reakcija s K – .
Kvalitativna definicija
Uzorci koji daju pozitivan RAL podliježu dodatnom ispitivanju (titraciji) za određivanje koncentracije ASO.
kvantitativno određivanje
Na temelju rezultata titracije odredite ASO titar – maksimalno razrjeđenje u kojem je dobiven pozitivan RAL.
ASO koncentracija (IU/ml)=200 IU/ml×(vrijednost recipročna ASO titru)
gdje je 200 IU/ml minimalna koncentracija ASO, određena prema RAL-u;
Primjer:
Maksimalno razrjeđenje = 1:8; ASO titar = 1:8;
Koncentracija ASO = 200´8 = 1600 IU/ml.
Pozitivna reakcija ukazuje na akutnu streptokoknu infekciju, pa se u ovom slučaju test mora ponoviti nakon tjedan dana kako bi se utvrdila dinamika bolesti.
Povišene razine ASO tipične su za bolesnike koji boluju od šarlaha, akutnog reumatoidnog artritisa, reumatske groznice, glomerulonefritisa, tonzilitisa i drugih streptokoknih infekcija, kao i za klinički zdrave kliconoše.
Ako je koncentracija ASO u uzorku veća od 1500 IU/ml, može se uočiti učinak prozona.
Lažno pozitivni rezultati mogu se uočiti u slučaju reumatoidnog artritisa, tonzilitisa i kod nekih zdravih kliconoša.
ANTISTREPTOLIZIN O (ASLO)
PAKET
E40062 40 testova Cijeli set
E40060 100 testova ASLO lateks reagens
E40063 100 testova Cijeli set
E40037 100 ml glicinskog pufera NaCl
NAČELOMETODA
Latex slajd test za kvalitativno i polukvantitativno određivanje antistreptolizina O u nerazrijeđenom serumu.
METODA
Komplet za testiranje ASLO lateksa sadrži čestice polistiren lateksa obložene stabiliziranim streptolizinom O kao antigenom koji imunološki reagira s odgovarajućim anti-streptolizin O (ASLO) antitijelima uzorka pacijenta ili kontrolnog seruma.
Pozitivna reakcija utvrđuje se vizualno aglutinacijom čestica lateksa u testnim stanicama na stakalcu.
REAGENSI
40
ili
100
testoviASLO lateks reagens
Suspenzija čestica polistirenskog lateksa obložena stabiliziranim streptolizinom O 1,0%
0,5 ml ili 1,0 ml Pozitivna kontrola
G ljudski serum spreman za uporabu koji sadrži koncentraciju ASLO potrebnu za aglutinaciju
0,5 ml ili 1,0 ml Negativna kontrola
Kontrola spremna za upotrebu koja ne reagira s lateks reagensom
S poklopac za 6 ćelija
Pufer glicin-NaCl100 ml pH 8,2 ± 0,2
Glicin 100 mmol/l
STABILNOST
Lateks reagens, pozitivna kontrola i negativna kontrola stabilni su do naznačenog roka valjanosti na 2-8°C.
Ne zamrzavati!
Oštećenje reagensa: čestice i zamućenost.
UZORAK
Serum
Stabilnost: do 7 dana na 2-8°C,
Do 3 mjeseca na -20°C.
Nemojte koristiti visoko hemolizirane ili lipemične uzorke.
SHEMA ISKOPA
Kvalitativno određivanje (test probira)
Stavite lateks reagens, pozitivnu kontrolu, negativnu kontrolu i uzorke seruma na mjesto na sobnoj temperaturi. Temeljito promiješajte čestice lateksa. |
|
Kap po kap u pojedinačne ćelije na slajdu: |
|
Pozitivna kontrola |
|
Negativna kontrola |
|
Lateks reagens u sve uzorke i kontrolne ćelije |
1 kap |
Miješajte različitim štapićima i rasporedite tekućinu po cijeloj površini u određene ćelije. |
|
Okrećite stakalce 2 minute tako da se smjesa polako kreće unutar stanica na stakalcu ili stavite na automatski rotator pri 100 okretaja u minuti. |
|
Nakon 2 minute očitajte rezultate pod jakim umjetnim svjetlom. |
(1 kap 40 µl)
INTERPRETACIJA REZULTATA
Aglutinacija pokazuje da ASLO sadrži više od 200 IU/mL u nerazrijeđenom uzorku. Serum s pozitivnim rezultatima testa probira treba ponovno testirati titracijom. (vidi dio 2)
Polukvantitativni test
Razrijeđeni uzorci glicin-NaCl puferom (šifra E40037):
Rasplod |
ASLO (IU/ml u nerazrijeđenom uzorku) |
1
+ 1 (1: 2) |
400 |
Nastavite test kako je opisano u 1. dijelu. |
INTERPRETACIJA REZULTATA
Očitajte titar u završnom koraku aglutinacijskog razrjeđivanja i pomnožite titar s faktorom 200 (vidi "Osjetljivost") kako biste dobili rezultate u IU/mL; na primjer: titar 1: 5 koncentracija ASLO
5 x 200 [IU/ml] = 1000 [IU/ml]
KALIBRIRANJE
Osjetljivost ASLO lateksa kalibrirana je prema međunarodnom ASLO kalibratoru (WHO).
NORMALNE VRIJEDNOSTI
Odrasli: do 200 IU/ml; djeca
Svaki laboratorij postavlja svoje vlastite normalne vrijednosti.
KONTROLIRATIKVALITETE
Za svaku seriju koriste se pozitivne i negativne kontrole. Njihove rezultate treba usporediti s rezultatima nepoznatih uzoraka kako bi se utvrdila razlika između moguće granulacije i aglutinacije.
Pozitivna kontrola – određena aglutinacijom u 2 minute.
Negativna kontrola – jednolična suspenzija bez aglutinacije nakon 2 minute.
KARAKTERISTIKE IZVEDBE
Analitička osjetljivost: -200 (±50 IU/ml)
Dijagnostička osjetljivost: 98%
Dijagnostička specifičnost: 97%
Učinak prozona: nije primijećen do 1500 IU/ml
Smetnje: Nije primijećeno kod hemoglobina do 10 g/l, bilirubina do 20 mg/dl, lipemije do 10 g/l i reumatoidnog faktora RF do 300 IU/ml. Druge tvari mogu ometati.
DIJAGNOSTIČKIZNAČENJE
Povećanje ASLO titra može biti povezano s reumatizmom i glomerulonefritisom. Povećani ASLO titar veći od 200 IU/ml ukazuje na akutnu streptokoknu infekciju. ASLO titre treba pratiti svaka 2 tjedna tijekom 4-6 tjedana.
BILJEŠKA
Samo za profesionalnu upotrebu.
Samo za in vitro upotrebu
Lateks reagens, pozitivna kontrola, negativna kontrola i glicin-NaCl pufer sadrže 0,095% natrijevog azida. Nemoj progutati. Izbjegavati kontakt s kožom i sluznicom.
Zbrinjavanje korištenih reagensa provodi se u skladu s
odredbe lokalnog zakonodavstva.
Svi reagensi ljudskog podrijetla testirani su metodama koje je odobrila Američka agencija za hranu i lijekove na prisutnost površinskog antigena hepatitisa B i HIV-a i pokazalo se da su negativni. Unatoč negativnom rezultatu, smatra se da svi reagensi mogu izazvati infekcije.
Zbog učinka sušenja, netočan pozitivan rezultat može se pojaviti nakon 2 minute.
Kao i sve dijagnostičke metode, konačna dijagnoza ne može se postaviti korištenjem rezultata jednog testa, već se mora temeljiti na odnosu više od jednog rezultata testa s drugim kliničkim rezultatima.
tel. (48 58) 556 52 46
(48 58) 556 52 31
fax (48 58) 341 12 49
80-298 Gdansk POLJSKA
![](https://i2.wp.com/gigabaza.ru/images/19/37528/e6f1b8ac.png)
![](https://i0.wp.com/gigabaza.ru/images/19/37528/2a9062e0.jpg)